抗体偶联药物（antibody-drug conjugate开云体育，ADC） 四肢新式抗体药物受到日益关心，临床上多用于肿瘤和洽。ADC 是单克隆抗体通过经营臂与细胞毒性小分子化合物共价偶联形成的复合物。该类药物应用了抗体的高特异性和细胞毒性药物对肿瘤细胞较强的杀伤本事，联结两者的上风，用以和洽恶性肿瘤。

ADC 的作用机制默示图

四肢一类新兴药物，ADC 的特有结构在进步药效、裁减毒性的同期，也使其质料分析使命更具挑战性。药物-抗体比（drug-to-antibody ratio，DAR），即ADC中抗体所佩带的细胞毒性小分子的数目，是ADC质料舍弃的中枢贪图。

DAR 决定了作用于肿瘤细胞的药物水平，可影响ADC的机体毒性。若 DAR 过低，则反馈出抗体的佩带遵守低，和洽遵守较差；若DAR过高，则ADC的毒性大大加多。

DAR测定的步调有多种，往往包括质谱法（mass spectrometry，MS）、紫外-可见分光光度法（ultraviolet-visible spectrometry，UV-Vis）和色谱法等，可左证ADC的特质及偶联工艺等因素选拔适当的步调，具体如下：

1、紫外/可见光谱法

紫外/可见光谱法是检测DAR值最大致踏实的步调，这种步调需要抗体和小分子药物具有不同的最大接纳波长，分手诡计二者的浓度进而获取ADC的DAR值，适用于多种ADC。该步调较为大致，操作浅易，早期应用较多，然而精准度不够，且只可获取平均DAR而无法得知样品的 DAR 散布等详备信息。

使用紫外/可见光谱法最初需要得志三个前提：

① 细胞毒性小分子应具有致密的吸光性能；

② 细胞毒性小分子和抗体的最大接纳波长不同；

③ 两者联结成的 ADC 分子不影响这两种物资各自的吸光性能，因为经营臂一般莫得吸光基团，是以不错忽略经营臂的吸光度 。

2、色谱法

色谱法包括疏水作用色谱（hydrophobic interaction chromatog raphy，HIC）和反相高效液相色谱法(reversed phase high performance liquid chromatography，RP-HPLC)两种，适用于测定半胱氨酸偶联的ADC。疏水作用色谱法能将不同DAR值的组分左证疏水性的各异分离开，且保执ADC分子的结构完好性；反相高效液相色谱法需要先将抗体复原获取轻、重链再进行分析，可用于补充考证疏水作用色谱法的收场，而况适用于质谱分析。

这两种色谱步调在 ADC，分析中的应用较其他色谱步调多，均适用于异质性较低的 ADC 的分析，关于因素较复杂的 ADC 如偶联位点为赖氨酸残基的ADC，则难以达到理念念的分离度。一般使用 HIC 分离样品后不会变成抗体结构的龙套，而 RP-HPLC 需要用复原反应将抗体的重链和轻链分离，不适用于经营臂为二硫键的 ADC，因为复原反应会将二硫键裂解，无法保证细胞毒性小分子与抗体的经营。

3、质谱法

质谱法左证DAR不同的分子在离子源中产生不同质荷比的离子，杀青其在质料分析器中的分离，因此可用质谱法杀青 ADC 分子的DAR分析。常用的质料分析器为遨游期间质料分析器（time of flight mass spectrometer，TOF）和离子肼质料分 析器，可获取较高分辨图谱。电离神气则常选拔基质赞成激光认知电离（matrix-assisted laser desorption ionization，MALDI），这种电离神气获取的遏制离子峰较少，利于分析。

频年来，非变性质谱分析（native-mass spectrome try，native-MS）在 ADC 的分析方面应用越来越多。一 般而言，native-MS 是在较高水平上研讨完好卵白质 偏执复合物的有劲器具，可提供样品的分子量和亚基陈设空间结构等信息 。与传统 MS 比较，该期间不错保证被分析卵白的结构完好性，同期具有更高的机灵度、分辨率和更快的分析速率，而况可杀青同分异构体的分离和糖基化气象的测定。

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